本次分享来自第一届兽医检测诊断大会（上海），澳大利亚动物健康实验室的大卫•威廉姆斯。笔者摘取其中诊断和检测技术，供大家参考。
Part 1
非洲猪瘟诊断病原学技术
1、非洲猪瘟的实验室诊断程序
2、ASFV感染后动力学
病毒血症和散毒，血液中病毒含量高，鼻和粪便拭子病毒水平低于2-3logs，
病毒散毒发生于临床症状出现前两天。
口腔液作为早期诊断推荐样品，EDTA抗凝全血推荐为确诊样品，谨慎剖检
在高毒力非洲猪瘟病毒GRG/07中：在血液、脾和淋巴结中病毒滴度高
3、报道的非洲猪瘟的主要PCR检测方法：
4、学到什么
多种病毒学和分子方法可用于检测和鉴定ASF病毒
• PCR是疫情调查和常规诊断的前沿检测方法，特点：
• 敏感,特定，快速
• 抗原检测试验敏感性较差，但成本低，速度快
• 病毒分离依赖于原代猪细胞，需要新的敏感细胞系
Part 2
非洲猪瘟诊断血清学技术
1、ASFV感染后动力学
病毒和抗体检测都应在爆发和控制/根除中进行
对于急性疾病的爆发，病毒检测（PCR）最有用，血清学诊断价值较低，因为大多数猪在抗体反应前死亡，在7-10天内；但是如果存在幸存的猪只，特别是ASFV转变为中等毒力或者弱毒力毒株之后，抗体检测的作用凸显；
2、抗体检测------ 一般考虑因素
• 由于没有疫苗，抗体的存在表明当前或过去的感染
• 抗体出现较早(7-10 dpi)，可在幸存者中持续数年
• 然而，在急性期或急性感染中，猪只常在产生可检测到的抗体之前死亡。因此，在疫情调查中也应采集样本进行病毒检测
• 抗体不能完全中和
• 建议进行以下血清学检查:
– ELISA作为一种筛选工具
– 间接荧光/过氧化物酶抗体试验(IFA/IPX)或免疫印迹(IB)确认
3、抗体检测的样品类型
• 血清
• Haemolysis à false positives in ELISA
• 溶血 à ELISA假阳性
• 血浆
• 猪肉浸出液，组织渗出物
• 口腔液
• 取样方便，无创
• Ab水平低于全血或血清
• 干血(滤纸或拭子)：方便取样和储存(例如在偏远地区或没有冷链时)；Ab水平低于全血或血清
4、抗体检测-取样技术
建议在处理和检测前加热灭活血清中的ASF病毒，以达到生物抑制和方便；
OIE推荐:56℃/70分钟或60℃/20分钟然而，这些条件可能无效
5、ELISA的优缺点：
• 优点
• 快速测试与解释
• 高通量、自动化
• 缺点
• 在监测研究中，IPX/IFA的敏感性低于IPX/IFA，可能代表的血清价偏低；当使用质量差的样品时，其特异性容易降低；确认性测试很重要，如果可能的话
6、口腔液的诊断潜能：
• 唾液和血清中含有抗体和病原体的混合物
• 作为猪病原体的另一种诊断样本
• 比如PRRSV, PCV2, influenza, ASFV
• 在圈中采样时，代表群(组)样本
• 成本效益高、简单、安全、“福利友好”、劳动强度较低
• 有潜力对大量猪群进行有效监测
总结：
• 一系列血清学技术可用来可靠地检测抗体的ASFV
• 建议与病毒检测方法一起使用，但在急性ASF暴发中，血清学的诊断价值较低
• 最常用的ELISAs; Se的不同水平
• IFA/IPX测定的Se最高，但主要用于参考实验室的确认
• 其他样本类型可用于抗体检测(例如血样、口腔液、组织渗出液)
